All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

儲運條件

-20℃

產(chǎn)品組成

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒，包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分，僅需加入RNA 模板和水即可開(kāi)始反應。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級后的一鏈cDNA 合成試劑盒，15 分鐘內最長(cháng)可獲得12 kb cDNA，產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實(shí)驗。從組織或細胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染，如果反轉錄前不做去除處理，下游進(jìn)行qPCR 反應時(shí)基因組DNA 與cDNA會(huì )同時(shí)進(jìn)行擴增，尤其是引物設計在同一外顯子上時(shí)，影響定量準確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA，并且具有熱敏感性，在逆轉錄反應溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比，dsDNase 無(wú)需額外加入EDTA 進(jìn)行失活，不僅節省實(shí)驗時(shí)間，而且降低了對逆轉錄反應的抑制?？梢罁蚪MDNA 污染嚴重程度，選擇去基因組DNA 污染與反轉錄分開(kāi)進(jìn)行，或者去基因組DNA 污染與反轉錄一步進(jìn)行的操作方法。

使用方法

針對基因組DNA 含量低的RNA 樣品（推薦方案）

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

① 于冰上配制如下反應體系：

a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；

④ 55℃溫育15 min；

⑤ 反應結束后，85℃溫育2 min 以終止反應；

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上，用于后續實(shí)驗；或立即保存于-20℃。

針對基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應體系：

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育2 min，以去除基因組DNA 污染；

注：若RNA 中基因組DNA 污染嚴重，可適當延長(cháng)37℃溫育時(shí)間至5 min。

④ 65℃溫育2 min，使dsDNase 失活，然后置于冰上。

2. 第一鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應體系：

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 50℃溫育15 min；

注：若目標RNA 不含Poly(A) 結構，可預先25℃溫育10 min。

④ 反應結束后，85℃溫育2 min，以終止反應；

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上，用于后續實(shí)驗。

注：cDNA 溶液置于-20℃儲存，建議不超過(guò)1 周；置于-80℃可長(cháng)期儲存。

注意事項

預混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機引物，不僅適用于包含Poly(A) 結構的真核生物mRNA，也適用于不含Poly(A) 結構的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板，但不適用于miRNA 等小RNA 模板。

美國Azaood公司成立于2004年，是一家開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的；Azood公司是通過(guò)了ISO9001認證的主要制造商，可以滿(mǎn)足從研究到大規模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。