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Universal SYBR Green qPCR Mix

Universal SYBR Green qPCR Mix

型號:AZ00007   更新時(shí)間:2023-11-08

簡(jiǎn)要描述:

Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法專(zhuān)用qPCR 試劑,為2× 預混液,包含除引物和DNA 樣品以外的所有qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。

品牌其他品牌供貨周期現貨
應用領(lǐng)域醫療衛生,環(huán)保,食品,生物產(chǎn)業(yè),制藥

儲運條件

長(cháng)期保存請于-20℃避光保存,Mix 融解后可在4℃避光條件下穩定存放一個(gè)月,盡量避免反復凍融。

產(chǎn)品組分

Universal SYBR Green qPCR Mix 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法專(zhuān)用qPCR 試劑,為2× 預混液,包含除引物和DNA 樣品以外的所有qPCR 組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。其核心組分是經(jīng)抗體修飾的熱啟動(dòng)Taq DNA 聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer 體系以及PCR 反應促進(jìn)因子,使產(chǎn)品具有特異性強、擴增效率高等特點(diǎn),有效抑制非特異性擴增,可對寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準確定量,獲得穩定可靠的qPCR 結果。預混液中含有通用校正染料,與絕大多數 qPCR 設備兼容,包括需要 ROX 校正的儀器,實(shí)驗過(guò)程中一般不需要額外添加校正染料。

使用方法

1. 使用注意

① 因Mix 中預混有染料,其保存或反應體系配制過(guò)程應避免強光照射;

② 使用前上下顛倒輕輕混勻Mix,請勿渦旋振蕩混勻,避免產(chǎn)生過(guò)多氣泡;

③ Mix 中含有Universal 校正染料,適用于所有機型,無(wú)需額外添加染料。

2. 建議的qPCR 反應體系

a. 通常推薦的引物終濃度為0.2 μM,反應效果不佳時(shí)可在0.1~1 μM 范圍內進(jìn)行調整;

b. 推薦模板加樣量為1~2 μl,如模板類(lèi)型為未稀釋cDNA 原液,模板添加量不應超過(guò)總反應體系的10%。不同種類(lèi)DNA 模板中含有的靶基因拷貝數目不同,必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)源_定最佳的DNA 模板添加量。

3. qPCR 反應程序(可根據機型適當調整)Universal SYBR Green qPCR Mix

兩步法

三步法

a. 根據引物的Tm 值進(jìn)行退火& 延伸(退火)溫度的設定;若擴增片段在200bp 以?xún)?,退?amp; 延伸(延伸)時(shí)間可以設置為15 sec;此外,退火& 延伸(延伸)時(shí)間的設置還需根據您使用的qPCR 儀所需要的最短數據采集時(shí)間自行調整;

b. 不同qPCR 儀的熔解曲線(xiàn)采集程序有差別,一般可使用儀器默認的熔解曲線(xiàn)采集程序。

4. 實(shí)驗優(yōu)化

若使用默認反應條件反應性能不佳時(shí),則需要進(jìn)行反應條件的優(yōu)化,可以從引物濃度以及擴增程序兩個(gè)方面進(jìn)行:

① 引物濃度調整

當引物終濃度在0.1~1.0 μM 范圍之間變化時(shí),引物濃度越低,擴增特異性越高,但擴增效率會(huì )有所下降。

② 擴增程序優(yōu)化

需提高擴增特異性,可使用兩步法程序或提高退火溫度;需提高擴增效率,可使用三步法程序或延長(cháng)延伸時(shí)間。

5. 引物設計原則

① 擴增產(chǎn)物長(cháng)度建議控制在80~200 bp;

② 引物長(cháng)度為18~25 bp;

③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超過(guò)1℃為佳,Tm 值控制在58~62℃為佳;

④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之間;

⑤ 引物A、G、C、T 整體分布盡量要均勻,避開(kāi)T/C 或者A/G 的連續結構(特別是3' 端);

⑥ 引物3' 端最后一個(gè)堿基最好為G 或者C;

⑦ 避開(kāi)引物內部或者兩條引物之間的互補序列;

⑧ 使用NCBI BLAST 功能檢索確認引物的特異性。

美國Azaood公司成立于2004年,是一家開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細胞分離試劑盒、胎牛血清的lingdao者;Azood公司是通過(guò)了ISO9001認證的主要制造商,可以滿(mǎn)足從研究到大規模批量生物加工和OEM應用與要求的公司。




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