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SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)

SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)

型號:   更新時(shí)間:2023-10-23

簡(jiǎn)要描述:

SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù) 利用IP純化蛋白質(zhì)復合物時(shí),除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外,細胞中一些與抗體/抗體偶聯(lián)材料(agarose、magnetic beads等)高親和的蛋白質(zhì)也會(huì )被一起捕獲下來(lái)(非特異性粘附蛋白),并且這些蛋白都是高豐度的。

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SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)簡(jiǎn)介:

利用IP純化蛋白質(zhì)復合物時(shí),除了能捕獲到Target蛋白及其互作蛋白之外,細胞中一些與抗體/抗體偶聯(lián)材料(agarose、magnetic beads等)高親和的蛋白質(zhì)也會(huì )被一起捕獲下來(lái)(非特異性粘附蛋白),并且這些蛋白都是高豐度的。故而,在后續的LC-MS鑒定時(shí),這些非特性的蛋白質(zhì)會(huì )被高頻率的檢測到。這就帶來(lái)了一個(gè)很困擾的問(wèn)題:由于沒(méi)有定量信息,在眾多鑒定到的蛋白質(zhì)中,如何才能排除非特性的粘附蛋白,找出真正的、與target特異性互作的蛋白。

將SILAC和IP技術(shù)相結合,借助SILAC引入質(zhì)量差異,IP完成后,蛋白質(zhì)復合物通過(guò)LC-MS分析,可同時(shí)完成定性(即鑒定,給出樣品中有那些蛋白質(zhì))和定量(給出每個(gè)蛋白質(zhì)被IP富集的相對程度)。根據定量結果結合軟件統計分析,即可直接區分出那些是target特異性的相互作用蛋白(SILAC ratio>1.0),那些是非特異性的粘附蛋白(SILAC ratio=1.0)。從而快速篩選和鎖定特異性的相互作用分子,后續生物學(xué)驗證成功率明顯提高。

技術(shù)和實(shí)驗方案”高、大、上“,能顯著(zhù)提高文章的檔次。

SILAC+IP-MS-蛋白質(zhì)互作定量分析整體服務(wù)方案:

客戶(hù)只需提供基因名稱(chēng)和細胞株即可,我方負責完成后續所有實(shí)驗,包括:

基因克隆與慢病毒制備。

穩定細胞株構建與鑒定。

細胞SILAC標記及標記效率檢測。

細胞擴增培養。

IP純化蛋白質(zhì)復合物并SDS-PAGE分離。

切割條帶,LC-MS測試分析。

MS數據定性和定量分析,依據SILAC的定量值(SILAC ratio)篩選潛在的互作蛋白。

挑選潛在的候選驗證蛋白(6個(gè))進(jìn)行后續驗證。承諾6個(gè)驗證蛋白,至少給出1個(gè)陽(yáng)性的互作。

參考文獻:

Nat Immunol 2014, 15(2):112-117.

Proc Natl Acad Sci U S A 2014, 111(51):18219-18224.

Science 2013, 340(6131):475-478.

Nat Cell Biol 2013, 15(6):625-636.


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