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昆蟲(chóng)細胞培養基CW003使用介紹
更新時(shí)間:2023-09-11   點(diǎn)擊次數:462次

產(chǎn)品描述

CW003培養基適用于sf9、High Five等昆蟲(chóng)細胞懸浮培養和瞬時(shí)表達,含有細胞生長(cháng)的全

部營(yíng)養成分,無(wú)需添加物即可使用。

產(chǎn)品特點(diǎn)

? 產(chǎn)品不含血清

? 即用型培養基,無(wú)需添加額外成分

? 支持sf9、High Five等昆蟲(chóng)細胞的懸浮培養馴化與高密度培養

? 支持桿狀病毒載體表達系統生產(chǎn)重組基因蛋白

基礎參數

產(chǎn)品使用方法

細胞馴化與傳代

1) 培養條件

溫度:27oC;推薦搖床轉速:110-130 rpm;傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2) 直接馴化

大部分情況下,培養于其他培養基中的sf9、High Five細胞,可以直接適應至CW003培養

基,只要按照日常傳代方式(稀釋?zhuān)└鼡Q培養基即可。

3) 漸進(jìn)式馴化

注意:選用低代次、處于對數的細胞進(jìn)行馴化。

①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長(cháng)穩定,使用原培養基

+CW003培養基(CW003比例從25%至90%)逐漸馴化,傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL,每48h進(jìn)行傳代。

②待細胞在含90%以上CW003培養基生長(cháng)正常后,可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養基

中,并連續傳代3-4次,如細胞保持穩定生長(cháng),即已適應至CW003培養基。

細胞復蘇

1) 迅速取出凍存的細胞,在37℃水浴條件下進(jìn)行快速解凍(可以在水中輕輕晃動(dòng),時(shí)間控制

在120s以?xún)龋?,至凍存管內剩余小塊冰晶。

2) 在生物安全柜中,將融化的細胞全部轉移至無(wú)菌離心管中,加入10 mL預熱至37℃的培養

基,離心換液(175 g,5 min)去除全部上清,加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養基重懸,后

轉移至搖瓶培養。

細胞凍存

1) 凍存細胞時(shí),要選擇處于對數、狀態(tài)良好,活力≥98%的的細胞;

2) 事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積,凍存密度為2.5-3.5×107 (通常凍存

濃度為1.0-2.0×107)cells/ml/支;

3) 細胞凍存液配制:

45%新鮮培養基+45%原培養基(上清)+10%DMSO,充分混勻,存放于4℃,一般為當

天用當天制備;

4) 以175 g,5 min的條件離心收集細胞,棄上清,用凍存培養基(

4℃ )重懸細胞;

5) 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無(wú)菌的凍存管中,每支1ml,并貼好標簽;

6) 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預冷)中,置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃),過(guò)夜存放后將細胞轉入液氮罐中進(jìn)行保存。


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