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        CW003 HSF95 Insect 昆蟲培養基等馴化方式
        發布時間:2023-02-03   點擊次數:156次


        產品描述

        CW003培養基適用于sf9、High Five等昆蟲細胞懸浮培養和瞬時表達,含有細胞生長的全

        部營養成分,無需添加物即可使用。

        產品名稱:HSF95 Insect Cell Medium

        產品貨號:CW003

        產品規格:1L

        產品特點

        ? 產品不含血清

        ? 即用型培養基,無需添加額外成分

        ? 支持sf9、High Five等昆蟲細胞的懸浮培養馴化與高密度培養

        ? 支持桿狀病毒載體表達系統生產重組基因蛋白

        基礎參數

        編輯

        產品使用方法

        細胞馴化與傳代

        1) 培養條件

        溫度:27oC;推薦搖床轉速:110-130 rpm;傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

        2) 直接馴化

        大部分情況下,培養于其他培養基中的sf9、High Five細胞,可以直接適應至CW003培養

        基,只要按照日常傳代方式(稀釋)更換培養基即可。

        3) 漸進式馴化

        注意:選用低代次、處于對數生的細胞進行馴化。

        ①在原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代2到3次至細胞生長穩定,使用原培養基

        +CW003培養基(CW003比例從25%至90%)逐漸馴化,傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106

        cells/mL,每48h進行傳代。

        ②待細胞在含90%以上CW003培養基生長正常后,可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養基

        中,并連續傳代3-4次,如細胞保持穩定生長,即已適應至CW003培養基。

        細胞復蘇

        1) 迅速取出凍存的細胞,在37℃水浴條件下進行快速解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制

        在120s以內),至凍存管內剩余小塊冰晶。

        2) 在生物安全柜中,將融化的細胞全部轉移至無菌離心管中,加入10 mL預熱至37℃的培養

        基,離心換液(175 g,5 min)去除全部上清,加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養基重懸,后

        轉移至搖瓶培養。

        細胞凍存

        1) 凍存細胞時,要選擇處于對數生、狀態良好,活力≥98%的的細胞;

        2) 事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積,凍存密度為2.5-3.5×107 (通常凍存

        濃度為1.0-2.0×107)cells/ml/支;

        3) 細胞凍存液配制:

        45%新鮮培養基+45%原培養基(上清)+10%DMSO,充分混勻,存放于4℃,一般為當

        天用當天制備;

        4) 以175 g,5 min的條件離心收集細胞,棄上清,用凍存培養基(

        4℃ )重懸細胞;

        5) 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無菌的凍存管中,每支1ml,并貼好標簽;

        6) 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預冷)中,置于-80℃ 冰箱(每

        分鐘下降1℃),過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。


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