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U937細胞效率轉染條件分享
更新時(shí)間:2021-08-25   點(diǎn)擊次數:1267次

U937細胞效率轉染條件分享

 

轉染材料準備

1、轉染試劑用量10ul

2、DNA/siRNA濃度:電訊

3、細胞密度:1*106-1*105

4、轉染用培養板:6孔板

5、轉染試劑:AD600025 Advanced DNA RNA轉染試劑

6、轉染時(shí)間:15小時(shí)

7、細胞培養胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清

8、細胞凍存液:L0100無(wú)血清細胞凍存液

 

操作過(guò)程:

1.提前1接種細胞細胞匯合度在60-80%左右,再進(jìn)行轉染。

2. 核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養基加入核酸復合物根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基里面可以含有血清。

4.細胞換液:轉染24小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液,懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。

5.分析結果質(zhì)粒DNA轉染48-72小時(shí)后熒光檢測轉染效率,48-96小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達。若進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉染后9小時(shí)熒光檢測轉染效率,48-72小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達。


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