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ZETA LIFE高效率轉染RAW264.7細胞成功案例
更新時(shí)間:2020-09-27   點(diǎn)擊次數:1314次

品牌:ZETA LIFE

名稱(chēng):advanced 轉染試劑

規格:0.25ml;0.5ml;0.75ml;1.5ml

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞(RAW264.7)是通過(guò)Abelson鼠白血病病毒誘導BALB/c小鼠產(chǎn)生腫瘤后得到的細胞株。其在醫學(xué)研究中應用十分普遍,是許多白血病相關(guān)研究模型的常用細胞株,在微生物學(xué)、免疫學(xué)等研究中也十分常用。但RAW264.7細胞形態(tài)和分化狀態(tài)多變,在實(shí)際培養中較難把握,給科研工作帶來(lái)了一定困難;且RAW264.7細胞很難轉染,許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉不進(jìn)去,或者僅有不到10%的轉染效率。因此RAW264.7細胞的培養及轉染方法就很值得去探討,本文就這些方面進(jìn)行介紹,以供科研工作者借鑒。

RAW264.7細胞的形態(tài)特征

很多人養RAW264.7細胞時(shí)發(fā)現自己的細胞出現偽足;就連ATCC的描述也稱(chēng)RAW264.7細胞形態(tài)多樣,可有圓形、類(lèi)圓形,以及長(cháng)出偽足的長(cháng)梭形、多邊形,可單核可多核。而實(shí)際,有偽足的情況是RAW264.7細胞受到外界刺激進(jìn)行了分化,是細胞衰老、分化的表現;RAW264.7細胞的“較佳”形態(tài)應是較小的單核圓形細胞。

RAW264.7細胞的培養條件

RAW264.7細胞的培養環(huán)境與一般貼壁細胞并無(wú)差異。即培養箱溫度為37℃,CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養基為DMEM+10%的胎牛血清;實(shí)際上,經(jīng)研究者們實(shí)驗發(fā)現高糖型DMEM培養的RAW264.7細胞傳代后貼壁更快、細胞生長(cháng)速度更快。因此,推薦使用高糖型DMEM,FBS濃度為10%,作為RAW264.7細胞的培養基。

RAW264.7細胞的傳代

關(guān)于RAW264.7細胞的傳代方法,ATCC推薦使用細胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細胞刮刀進(jìn)行傳代時(shí),細胞能較大限度被收集起來(lái),但會(huì )對細胞造成機械性損傷、影響細胞形態(tài)及貼壁時(shí)間等。采用胰酶消化時(shí),由于RAW264.7細胞貼壁較牢,消化時(shí)間就較長(cháng)。但消化時(shí)間點(diǎn)不易把握,易消化過(guò)度,對細胞生長(cháng)造成抑制。

因此,推薦使用彎嘴吸管吹打進(jìn)行傳代。具體做法是,當細胞達到傳代密度時(shí),先棄去培養基,用預冷的PBS洗滌兩次,用彎嘴吸管吸取培養基,均勻、稍用力吹打瓶底,即可將細胞吹打下來(lái)(吹不下來(lái)的就不要了),離心后重懸即可分瓶培養。2 h后可見(jiàn)細胞貼壁。

由于RAW264.7細胞生長(cháng)速度較快,一般1-2d換液1次,密度長(cháng)至60%-70%左右即可傳代,傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久,細胞生長(cháng)密度過(guò)大,細胞也容易發(fā)生分化,出現長(cháng)偽足的多形細胞。

RAW264.7細胞的凍存及復蘇

RAW264.7細胞的凍存及復蘇方法與一般貼壁細胞并無(wú)較大差別。但由于RAW264.7細胞對外界刺激較敏感,對營(yíng)養條件要求較高,許多人建議降低DMSO的濃度,增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養基(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的培養及其在誘導破骨細胞中的應用,許丹等,中國骨質(zhì)疏松雜志,2016, 10, 22, 10)。

 RAW264.7細胞的轉染

轉染成功案例詳見(jiàn)下圖:

河北醫科大學(xué)科研者提供

使用Zeta Life 轉染試劑48小時(shí)熒光圖片

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